荧光探针和时间分辨成像因其高灵敏度,高空间分辨率和简易性,广泛使用于复杂生物体系中,这种技术对于阐明生物功能提供了一个良好的平台。时间分辨荧光显微镜在监测目标荧光方面具有优势,与传统使用荧光团进行荧光成像中几个纳秒的寿命尺度相比,长寿命的发光染料可以利用脉冲激发光与测量时刻,通过适当的延迟以及门控技术使得收取的信号背景荧光,并提供高的信号-噪声比。典型的有机磷光染料如曙红以及一些贵金属配合物,因为它们较长的磷光寿命有着高的是很好时间分辨成像染料。
在以往被报道应用于时间分辨成像中的长寿命发光染料,大多数是使用具有长寿命三重态的磷光材料,磷光过程中存在着自旋禁阻,磷光材料往往通过引入Ir(Ⅲ),Pt(Ⅱ),Ru(Ⅱ)等贵金属形成配合物的方式提高其三重态量子产率进而增强其发光性能。
这些磷光材料中的一些化合物会通过单线态氧将三重态能量转移到周围的细胞或组织中的生物分子而杀细胞,同时一些金属配合物具有大的细胞毒性,因而抑制了这些染料应用于时间分辨成像中。为了增长荧光染料的寿命同时避免重金属配合物对细胞的毒性效应,有开发新型的长寿命的荧光染料。